生物试剂
产品简介
Cas9 Nuclease是一种来源于酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)在大肠杆菌中重组表达的特异性位点DNA内切酶。在特异性单向导RNA (sgRNA) 的引导下，Cas9 Nuclease能够识别靶位点下游紧邻的5'-NGG-3' (PAM)序列,在体外高效地切割双链DNA。Cas9 Nuclease一旦成功定位并识别PAM，Cas9蛋白会激活其HNH和RuvC两个核酸内切酶结构域，分别在靶DNA链的互补链和非互补链上制造一个切口，最终产生一个平末端的双链断裂(DSB)。
产品组成
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组分 |
E405 |
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Cas9 Nuclease (1 μM) |
50 μl |
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10 × Cas9 Reaction Buffer |
1 ml |
产品应用
CRISPR/Cas9系统的体外DNA切割
基因编辑验证
DNA片段化
gRNA活性评估
单位定义
在标准反应体系下，37℃ 1 h内在sgRNA引导下完全切割1 pmol线性化质粒DNA底物所需的酶量定义为一个活性单位。
质量控制
核酸外切酶残留检测：
20 U本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：
20 μl反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
RNase残留检测：
20 U本品和1 μg Hela细胞总RNA在37℃下孵育30 min，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：
50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16s rDNA基因。30个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，染色，无扩增条带。
储存条件
-20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。
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