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【R111】M-MLV (H-) Reverse Transcriptase II(耐受72℃)

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【R111】M-MLV (H-) Reverse Transcriptase II(耐受72℃)

售价
400.0
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产品编号
R111
数量
-
+
库存:
999
暂时无货
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产品描述
说明书
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M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase II (Moloney Murine Leukemia Virus,莫洛尼鼠白血病病毒),为 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase (ATG#R101) 改造升级版。该酶是在野生型 M-MLV 逆转录酶基因基础上经过点突变改造,并通过特殊工程菌表达纯化而成,在保留上一代酶活性如依赖于RNADNA聚合酶活性、依赖于DNA DNA聚合酶活性、无RNase H活性的基础上,又再次提高了逆转录效率和耐热温度,使其逆转录温度可达 72℃,从而增强了对 RNA 复杂二级结构的耐受性。本品具有合成能力高,热稳定性好和半衰期长等特点。与常见的通过删除 RNase H 结构域方法得到的突变体相比,本产品保留了完整的蛋白结构,因此具有与野生型相同的聚合酶活性。

逆转录效率高

耐热温度高

保真度高

耐受复杂二级结构RNA

RNase H活性

IVD分子诊断

RT-qPCR/RT-LAMP/RT-RPA

cDNA合成及文库构建

5’ RACE

组分 R111(10000U)
M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase II (200 U/µl)
50 μl
5 × RT Buffer
500 μl

-20℃保存,于-20 ~ 0℃运输。避免反复冻融。

逆转录最适温度测试:

在不同温度条件下,利用 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase II RNA 进行逆转录反应 45 min,并用qPCR检测逆转录效率。

结论:

1. M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase II 72℃逆转效果最佳;

2. M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase II 40℃-78℃的温度区间均能进行高效逆转录。

核酸外切酶残留检测:200 U 本品和 50 pmol 单链 DNA 底物在 37℃下孵育 16 h,经变性 PAGE 电泳,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U 本品和 0.5 μg 质粒 DNA 37℃下孵育 4 h,经琼脂糖凝胶电泳,质粒的电泳谱带不发生变化。

RNase 残留检测:200 U 的本品和 1 μg RNA 37℃下孵育 30 min,经琼脂糖凝胶电泳,RNA 的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌 DNA 残留检测:60 U 本品中残留的核酸经 E.coli gDNA 特异性的 qPCR 检测,E.coli 基因组残留低于 10 拷贝。

功能检测:逆转录体系中加入 200 U 本品,以 1 μg RNA 为模板,Oligo (dT) 18 为引物,42℃ 反应 45 min。取 1/10 cDNA 产物进行 PCR 扩增 VIN 基因。琼脂糖凝胶电泳,EB 染色,可见有单一的 4.6 kb 条带。

关键词:
【R111】M-MLV (H-) Reverse Transcriptase II
M-MLV (H-)
逆转录酶
反转录酶
cDNA合成
高温逆转录
高温反转录
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