生物试剂
T7 RNA Polymerase来自重组E.coli BL21菌株发酵表达纯化，无内源核酸残留、无内外切酶残留污染。该酶对T7噬菌体启动子(TAATACGACTCACTATAG)具有高度的特异性，并以其作为启动子，DNA作为模板体外合成正义链或反义链 RNA。双链线性平末端或 5’突出末端DNA均可作为T7 RNA Polymerase的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成 RNA 的模板。
产品优点：转录效率高、合成RNA类型多样、RNase污染控制严格。
产品性能：参照非修饰RNA合成反应体系及实验流程，向反应体系中加入Template DNA (1.4 kb) 500 ng，37℃孵育2 h，转录合成RNA ，得到RNA产物经DNase I处理后，通过变性琼脂糖凝胶电泳检测，并在NanoDrop™分光光度计上定量得出RNA产物达到300 μg左右，检测结果如图1所示。
mRNA 疫苗制备
单链 RNA 转录合成
制备放射标记的 RNA 探针
合成用于体外转录和微量注射的 mRNA
合成用于结构及功能研究的 RNA
非同位素标记的 RNA
合成基因表达实验的反义 RNA
合成基因靶向功能的 gRNA
| 组分 |
RM101 (5,000 U) |
|
T7 RNA Polymerase (50 U/μl) |
100 μl |
|
10 × T7 Transcription Buffer |
100 μl |
|
Activator
|
50 μl
|
-20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。
核酸外切酶残留检测：200 U本品和50 pmol单链DNA底物在37℃下孵育16 h，经变性PAGE电泳，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U 本品和 0.5 μg 质粒DNA在37℃下孵育4 h，经琼脂糖凝胶电泳，质粒的电泳谱带不发生变化。
RNase 残留检测：200 U的本品和1 μg RNA在37℃下孵育 30 min，经琼脂糖凝胶电泳，RNA的电泳谱带不发生变化。
1. 使用本试剂时，请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、使用 RNase-free 耗材，避免RNase污染。
2. 建议纯化Template DNA，避免RNase、RNA及蛋白残留。
3. 进行体外转录合成RNA时，本产品不仅适用于含有T7 Promoter的线型 Plasmid，也适用于带有T7 Promoter序列的PCR产物及Oligo DNA等。
4. 反应体系中可添加RNasin (ATG#RR101) 防止RNase污染，建议使用浓度 1 U/μl。
5. 若要除去模板DNA，可配合本司产品DNase I (ATG#E103) (RNase-free) 除去，详见产品说明书(ATG#RM201) (ATG#E103)。
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