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【M101】 T4 DNA Ligase

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产品编号
M101
所属分类
传统/TA克隆
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产品描述
说明书
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T4 DNA Ligase 可催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核酸的 5’磷酸末端和 3’羟基末端形成磷酸二酯键,该催化反应需ATP作为辅助因子。还可修补双链DNA、双链 RNADNA/RNA杂合物上的单链缺口,但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记 RNA 3'-末端,环化RNADNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA 等核酸操作。

活性定义

 20 μl的连接反应体系中,6 μg  λ DNA- Hind III 的分解物在 16℃下反应 30 分钟时,有 90%以上的 DNA 片段被连接所需要的酶量定义为 1 个活性单位(U)。

酶贮存溶液:10 mM Tris-HClpH 7.5), 50 mM KCl ,1 mM DTT , 0.1 mM EDTA , 50 % Glycerol

组分
M101 (40,000 U)
T4 DNA Ligase800 U / μl 50 μl
10×T4 DNA Ligase Buffer 200 μl

-20℃保存,于-20 ~ 0℃运输。避免反复冻融。

核酸外切酶残留检测:20 U本品和0.6 μg λ-Hind III 74℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:20 μl反应体系,10 U本品和 1 μg λDNA37℃温育4 hDNA 的电泳谱带无变化。

RNase 残留检测:20U本品和1 μg Hela细胞总RNA 37℃下孵育30minRNA 的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌残留DNA残留检测:50 μl 体系中,以本品为模板,扩增 E. coli 16 s rDNA 基因。30个循环后进行 1%琼脂糖凝胶电泳,染色,无扩增条带。

关键词:
【M101】 T4 DNA Ligase
TA克隆
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